高效毛细管电泳仪实验过程中常见问题解答


序号

现象

可能原因

纠正措施

1

 电源开启后毫无反应

 1.电源没接通
 2.保险丝已断

 将仪器插头从电源插座中取出,确认插座里有电,检  查保险丝,更换电源线。

2

 电流指示为零

 电极断掉,弯曲或没有插对

 更换、校正、重插。

3

 仪器实验过程中电流不  稳或电流指示远底于正  常值,但电压值正常

 1.毛细管堵塞
 2.毛细管中无缓冲溶液
 3.毛细管破裂
 4.电压未加
 5.仪器参数设定错误
 6.柱内有大气泡
 7.用水做溶剂配样,在压力进样时将一部分水    压入缓冲溶液中

 重新用HCl、NaOH清洗毛细管或剪去进样端小段毛细  管,如果仍旧不能清洗,更换毛细管。
 检查毛细管是否浸在缓冲溶液中。
 更换毛细管。
 检查电压值。
 重新设定仪器参数。
 重新注入缓冲溶液。
 用稀释的运行缓冲溶液代替水配样。

4

 电流指示过高

 毛细管柱过热

 用干净缓冲溶液冲洗毛细管柱,使之冷却。

5

 电流指示不断变化

 1.毛细管内有许多小气泡
 2.环境温度过高或过底,通风不好

 重新注入缓冲液。
 调整环境温度,最好使用控温装置。

6

 恒压操作时电压显示值  闪 动

 电流设置过底

 重新设置电流值。

7

 电泳谱图上没有出现峰

 1.样品浓度太低或体积太小
 2.样品被管壁严重吸附
 3.毛细管检测窗与检测器光路未对准
 4.信号线连接错误

 增加样品浓度或样品体积。
 对毛细管壁进行修饰处理。
 取出毛细管,重新安装。
 检查信号线连接情况。

8

 基线漂移或噪声较大

 1.毛细管被污染或未清洗
 2.毛细管柱的光学窗口被污染
 3.有小气泡
 4.操作电压太高
 5.缓冲溶液浓度太大
 6.缓冲溶液或样品中有小颗粒物质
 7.毛细管有很小裂缝
 8.检测器灯源老化
 9.接地问题
 10.检测器参数设定错误
 11.数据系统设定错误

 用0.5mol/LNaOH溶液、水、缓冲液清洗毛细管。
 取下检测池,清洗光学透镜。
 缓冲溶液脱气。
 降低操作电压。
 降低冲溶液浓度。
 过滤缓冲溶液或样品溶液并检查缓冲溶液与样品是否  发生作用。
 更换毛细管。
 更换灯源。
 将检测仪和电泳仪连接在同一电源上。
 检查检测器参数设定值。
 重新设定数据处理参数。

9

 基线太平

 1.毛细管检测窗与检测器光路未对准
 2.电压未加上
 3.信号线连接错误
 4.毛细管堵塞
 5.检测灯源损坏
 6.检测器参数设定错误
 7.数据系统设定错误

 重新安装毛细管。
 检查电压值。
 检查信号线是否连接正确。
 冲洗或更换毛细管。
 更换灯源。
 检查检测器参数设定值。
 重新设定数据处理参数。

10

 电进样障碍

 1.样品带电性质相反
 2.样品离子强度过高
 3.pH不适宜,使样品形态改变
 4.样品离子强度过底

 改变电极方向。
 稀释样品。
 调整pH值。
 增加样品离子强度。

11

 压力进样障碍

 1.毛细管断裂

 更换毛细管。

12

 进样重复性差

 1.进样时间太短
 2.毛细管管壁有吸附
 3.缓冲溶液的离子强度不恒定
 4.样品粘度不一致
 5.样品或缓冲溶液蒸发

 延长进样时间。
 采用管壁作过处理的管子。
 更换缓冲溶液。
 校正样品粘度,使用内标校准。
 补充,降低样品温度。

13

 灵敏度差

 1.进样量太小
 2.毛细管污染
 3.检测器灯源老化
 4.检测器参数设定错误
 5.数据系统设定错误

 增加进样时间。
 清洗或更换毛细管。
 更换灯源。
 检查检测器参数设定值。
 重新设定数据处理参数。

14

 无峰

 1.波长设置错误
 2.样品变性
 3.样品浓度太底或体积太小
 4.样品已被吸收或沉淀
 5.样品缓冲溶液的液面降低或已没有液体
 6.毛细管的检测窗口没有对上
 7.使用的新毛细管

 重新设置。
 重新取样配样。
 增加样品浓度或体积。
 更换。
 补充或更换。
 取下检测池,重新安装。
 有的新柱在第一、二次进样时无峰,可连续进几次样。

15

 峰小

 1.满量程设置太高
 2.波长设置不佳

 重新软件设置。
 重新设置波长。

16

 柱效低

 1.毛细管污染
 2.焦耳热太大
 3.样品溶液导电性太高
 4.缓冲溶液虹吸
 5.进样量太大

 清洗或更换毛细管。
 降低电压、缓冲溶液的浓度。
 用水稀释样品、样品去盐、增加缓冲溶液的浓度。
 使电极两端的缓冲溶液液面相同。
 减少进样量。

17

 峰太少

 1.检测波长设置有误
 2.分析时间设置有误
 3.毛细管管壁吸附
 4.样品中有荷质比相近的组分

 检查检测器波长设置。
 加长分析时间设置。
 对管壁作必要的处理。
 调整pH,改变缓冲溶液种类或采用其他分离模式。

18

 峰太多

 1.气泡
 2.缓冲溶液中有固体杂质
 3.前一次分析的样品残留
 4.样品分解

 缓冲溶液彻底除气。
 过滤缓冲溶液。
 冲洗毛细管柱。
 减低柱温或更换样品。

19

 峰太低

 1.检测波长不适宜
 2.检测器不适宜
 3.样品失效

 调整检测波长。
 改变检测方法。
 样品长时间放置可能已经分解,或挥发,更换样品。

20

 峰平头

 1.样品太浓

 减少进样时间,或稀释样品。

21

 峰拖尾

 1.电流太大

 2.样品与管壁作用

 降低缓冲溶液离子强度或降低电压。
 调整缓冲溶液、加有机改性剂、管壁处理、改变分离  模式等。

22

 峰迁移重复性差

 1.温度变化是粘度和电渗改变
 2.毛细管壁的吸附改变电渗
 3.由于在较高(或较低)pH下老化毛细管柱,  或使用过低(或过高)pH的缓冲溶液造成壁电  荷滞后
 4.缓冲溶液组成变化(原因包括电解,使pH改  变,缓冲溶液蒸发,冲洗废液进入出口贮槽等  )
 5.进出口两贮器的液面不在一个水平上形成管  内溢流并不可重复
 6.不同批号的管子硅醇含量不一是壁电荷不同  或电渗有变

 检查毛细管恒温装置,使之正常工作,对没有恒温装  置的要用缓冲溶液冲洗柱子。
 对毛细管老化,或提供足够的平衡时间。
 避免pH 差别,提供足够的平衡时间。
 使用单独的贮器收集废液,先将毛细管插进缓冲溶液  或水中。
 使前后两贮器的液面保持一致。
 使用同一批号的管子。

 

23

 峰面积重复性差

 1.温度变化改变了粘度和进样量
 2.样品溶剂蒸发增加了样品浓度
 3.样品转移造成额外样品进入毛细管
 4.样品被吸附到壁上使峰形受损或使之不能流    出
 5.信噪比太低造成积分误差
 6.突然施加高压,是缓冲溶液热膨胀样品流出  7.电进样引起的样品歧视

 设法使毛细管恒温。
 对样品加盖或冷却进样器。
 使用带扁平光滑进样端的毛细管,除去毛细管进样端  的聚酰亚胺,在进样后把毛细管浸到缓冲溶液或水中  洗一下。
 改变缓冲溶液的pH值,增加缓冲溶液的浓度,使用添  加剂。
 优化积分参数,增加样品浓度,使用峰高定量。
 逐段升高压。
 使用压力进样,或采取定量校正。

 

 


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